Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Allopatric chromosomal variation in Nematocharax venustus Weitzman, Menezes & Britski, 1986 (Actinopterygii: Characiformes) based on mapping of repetitive sequences

Characiformes is the most cytogenetically studied group of freshwater Actinopterygii, but karyotypical data of several taxa remain unknown. This is the case of Nematocharax , regarded as a monotypic genus and characterized by marked sexual dimorphism. Therefore, we provide the first cytogenetic report of allopatric populations of Nematocharax venustus based on distinct methods of chromosomal banding and fluorescence in situ hybridization (FISH) with repetitive DNA probes (18S and 5S rDNA). The karyotype macrostructure was conserved in all specimens and populations, independently on sex, since they shared a diploid number (2n) of 50 chromosomes divided into 8m+26sm+14st+2a. The heterochromatin was mainly distributed at pericentromeric regions and base-specific fluorochrome staining revealed a single pair bearing GC-rich sites, coincident with nucleolar organizer regions (NORs). On the other hand, interpopulation variation in both number and position of repetitive sequences was observed, particularly in relation to 5S rDNA. Apparently, the short life cycles and restricted dispersal of small characins, such as N. venustus , might have favored the divergence of repetitive DNA among populations, indicating that this species might encompass populations with distinct evolutionary histories, which has important implications for conservation measures.

Characiformes é o grupo de Actinopterygii de água doce mais estudado citogeneticamente, porém dados cariotípicos de vários taxa permanecem desconhecidos. Este é o caso de Nematocharax , considerado um gênero monotípico e caracterizado pelo acentuado dimorfismo sexual. Em vista disso, nós fornecemos a primeira descrição citogenética de populações alopátricas de Nematocharax venustus , baseada em métodos distintos de bandamento cromossômico e hibridação fluorescente in situ (FISH) com sondas de DNA repetitivo (DNAr 18S e 5S). A macroestrutura cariotípica mostrou-se conservada em todos os espécimes e populações, independentemente do sexo, uma vez que compartilharam um número diploide (2n) de 50 cromossomos dividido em 8m+26sm+14st+2a. A heterocromatina distribuiu-se principalmente nas regiões pericentroméricas e a coloração com fluorocromos base-específicos revelou um único par portador de sítios GC-ricos, coincidentes com as regiões organizadoras de nucléolo (RONs). Por outro lado, foi observada uma variação interpopulacional no número e na posição das sequências repetitivas, especialmente em relação ao DNAr 5S. Aparentemente, ciclos de vida curtos e dispersão restrita dos pequenos caracídeos, tal como N. venustus , podem ter favorecido a divergência do DNA repetitivo entre as populações, indicando que essa espécie pode englobar populações com distintas histórias evolutivas, o que tem implicações importantes para medidas de conservação.

Cytogenetic data on Astyanax jacuhiensis (Characidae) in the lago Guaíba and tributaries, Brazil

Cytogenetic analyses were performed in Astyanax jacuhiensis from lago Guaíba, Brazil. The diploid number was 50, with a karyotype composed of 8m+30sm+4st+8a chromosomes, FN = 92. The AgNORs were observed in 2 to 5 chromosomes, with intra- and interindividual variation. The sm pair 8 observed always carried NORs on the short arms, presenting size heteromorphism between homologous. Fluorescence in situ hybridization (FISH) with an 18S rDNA probe only confirmed the location of ribosomal cistrons in the sm pair 8, and heteromorphism of these regions between the homologous chromosomes. C-banding revealed the occurrence of weak C-positive heterochromatin in the pericentromeric regions of several chromosomes, in addition to more evident bands interstitially located on some chromosome pairs and in the terminal region of the short arms in pair 8. C-banding plus CMA3 revealed light fluorescent signals in different chromosomes of the karyotype, with a strong terminal site in pair 8, indicating the occurrence of several GC-rich heterochromatic regions in this species. Our results provide the first description of the Astyanax jacuhiensis karyotype, showing karyotype similarities when compared to various populations of A. altiparanae and A. bimaculatus, indicating that chromosomal features are very similar for these three species.

Análises citogenéticas foram realizadas em Astyanax jacuhiensis do lago Guaíba, Brasil. O número diplóide foi 50, sendo o cariótipo composto por 8m+30sm+4st+8a cromossomos, NF = 92. As regiões organizadoras de nucléolos (AgNORs) foram observadas em 2 a 5 cromossomos, evidenciando uma variação intra e interindividual nesta espécie. O par sm 8 foi constantemente detectado com NORs nos braços curtos, mostrando um heteromorfismo de tamanho entre os homólogos. Entretanto, a hibridação in situ fluorescente (FISH) com sonda de DNAr 18S, localizou cístrons ribossômicos apenas no par 8, confirmando o heteromorfismo de tamanho entre os homólogos. O bandamento C revelou a presença de bandas discretas de heterocromatina na região pericentromérica da maioria dos cromossomos, além de algumas bandas mais evidentes intersticiais, bem como na região terminal dos braços curtos do par 8. A associação de BC+CMA3 evidenciou marcações fluorescentes mais discretas em diferentes cromossomos e uma forte marcação terminal no par 8, confirmando vários sítios de heterocromatina GC-rica nessa espécie. Nossos resultados fornecem a primeira descrição do cariótipo de Astyanax jacuhiensis, apresentando semelhanças em relação ao cariótipo de diferentes populações de A. altiparanae e A. bimaculatus, indicando que as características cromossômicas são muito semelhantes para estas três espécies.

Rapid detection of Salmonella sp. in pork samples using fluorescent in situ hybridization: a comparison with VIDAS®-SLM system and ISO 6579 cultural method / Detecção rápida de Salmonella sp. em amostras de suinos por hibridação in situ fluorescente: comparação com o sistema VIDAS®-SLM e com o método de cultura ISO 6579

This study reports the use of the fluorescent in situ hybridization (FISH) with Sal3 probe for Salmonella detection in swine carcasses inner surface (swab); and in the correspondent samples of ileum, ileocolic, and mandibular lymph nodes; and tonsils, after dilution (1:10) in buffered peptone water and a pre-enrichment step (37(0)C, 18h). In order to evaluate the efficiency of FISH, 235 naturally contaminated samples were simultaneously tested by the cultural method (ISO 6579) and by the Vitek Immuno Diagnostic Assay System (VIDAS®) - Salmonella (SLM) system. The cultural method identified 39 positive samples. From these, VIDAS®- SLM only detected 23. FISH identified 115 positive samples. This difference was highly significant (P<0.001). From positive samples, 32 were also confirmed by the cultural method. The results indicate FISH as a promising tool for rapid Salmonella detection in samples of pork and swine carcasses

Descreve-se a utilização da técnica de hibridação in situ fluorescente (FISH), utilizando a sonda Sal3, para detecção de Salmonella na superfície interna de carcaças de suínos (zaragatoa), em amostras correspondentes de íleo, linfonodos ileocólicos, linfonodos mandibulares e amígdalas, após terem sido diluídas (1:10) e submetidas a uma fase de pré-enriquecimento em água peptonada tamponada (a 37ºC, 18h). Para avaliar a eficácia do método FISH, analisaram-se 235 amostras naturalmente contaminadas, usando o método de cultura ISO 6579 e o sistema Vitek Immuno Diagnostic Assay System (VIDAS®)- Salmonella (SLM), simultaneamente. O método de cultura identificou 39 amostras positivas, das quais o método VIDAS®-SLM detectou apenas 23. O método FISH identificou 115 amostras positivas. A diferença entre os métodos foi altamente significativa (P<0.001). Das amostras positivas, 32 foram confirmadas pelo método de cultura. Os resultados indicam que a FISH constitui uma promissora técnica de detecção rápida de Salmonella em amostras de suínos abatidos para consumo